Abstrakt

Tragické infekce pohlavních orgánů jsou v mnoha regionech stále velkým zdravotním problémem. Tato studie byla provedena s cílem zjistit prevalenci cervikální infekce virem Herpes simplex (HSV), Chlamydia trachomatis (CT) a Neisseria gonorrhoeae (NG) mezi vdanými ženami, které se obrátily na Iranian Hospital, Dubaj, SAE. Do retrospektivního průřezového průzkumu bylo zařazeno 201 pacientek ve věku 16-80 let, které byly v roce 2010 odeslány na porodnicko-gynekologické oddělení Iranian Hospital, Dubaj, SAE. Pacientky byly rozděleny do tří věkových skupin: 15-30 let (skupina I), 31-40 let (skupina II) a 41 let (skupina III). Každé ženě byl odebrán vzorek stěru z děložního hrdla a metodou PCR byla stanovena prevalence cervikální infekce HSV, CT a NG. HSV, CT a NG byly zjištěny u 6,5 %, 10,4 % a 5,5 % vzorků stěrů. Pokud jde o věk, byl zaznamenán významný rozdíl v prevalenci NG a HSV mezi skupinami I a III. Vzhledem k zdravotnímu významu sexuálně přenosných chorob (STD), jejich dlouhodobému dopadu na kvalitu života a ekonomické zátěži se preventivní opatření a edukace žen jeví jako nezbytné.

1. Úvod

Tragické infekce pohlavních orgánů jsou stále velkým problémem veřejného zdraví v mnoha regionech . Ročně bylo ve Spojených státech hlášeno více než 15 milionů nových případů sexuálně přenosných chorob (STD) . U žen mohou některé z nich vést k dlouhodobým pánevním zánětlivým onemocněním, neplodnosti, mimoděložnímu těhotenství, dyspareunii a rakovině děložního čípku . Každoročně se více než polovina všech nových případů pohlavně přenosných chorob vyskytuje u mladých osob ve věku 15 až 24 let . Kromě toho mohou u mladých a dospívajících žen vést k depresi, nízké sociální podpoře a výraznému stresu .

Většina pohlavně přenosných chorob, jako je virus Herpes simplex (HSV), Chlamydia trachomatis (CT) a Neisseria gonorrhoeae (NG), byla u žen prokázána jako asymptomatická . Genitální herpes je obecně považován za běžnou chronickou pohlavní chorobu v rozvinutých i rozvojových zemích se značnou morbiditou . Infekci způsobují dva typy virů včetně HSV-2 (převážně) a HSV-1 (někdy), přičemž jejich prevalence a incidence se v posledních třech desetiletích zvýšila .

CT infekce je nejčastější příčinou bakteriální STD ve světě, zejména u mladých žen . Infekce je ve většině případů asymptomatická a může se přenášet při vaginálním, orálním nebo análním pohlavním styku a může se přenést i z matky na novorozence .

Gonoreu způsobuje NG a bylo prokázáno, že tento patogen má potenciál vyvinout rezistenci vůči často používaným antimikrobiálním látkám, zejména u neléčených pacientů. Tyto případy mohou pokračovat v přenosu a usnadnit rychlý vznik antimikrobiální rezistence . Incidence onemocnění je vysoká, proto je diagnostika symptomatických i asymptomatických infekcí velmi důležitá .

V posledních letech se jako běžné, pohodlné a rychlé metody screeningu pohlavně přenosných chorob používají rychlé detekční soupravy a dipesty. Nové molekulární metody, jako je PCR, kvalitativní a kvantitativní PCR v reálném čase a hybridizace DNA, však byly zavedeny jako spolehlivější techniky v diagnostice široké škály pohlavně přenosných chorob ve srovnání se sérologickými metodami. Sledování hladiny DNA patogenu v tělních tekutinách navíc může odhalit stav onemocnění, jeho reakci na léky a vzorce rezistence .

V Dubaji ve Spojených arabských emirátech se změnil životní styl jednotlivců. Kromě toho do tohoto města přišlo mnoho migrujících pracovníků nebo investorů z více než 100 zemí z Asie, Afriky, Evropy atd. Vzhledem k tomu, že Dubaj je osmým turisticky nejnavštěvovanějším městem na světě a bylo prokázáno, že do roku 2015 přilákala více než 15 milionů turistů z různých zemí, mohou být proto pohlavně přenosné choroby v Dubaji, SAE, novým problémem veřejného zdraví. Screening pohlavně přenosných chorob u obyvatel Dubaje může být prvním a velmi důležitým krokem při řešení problému veřejného zdraví. Cílem této studie bylo zjistit prevalenci cervikální infekce HSV, CT a NG u vdaných žen, které se obrátily na Íránskou nemocnici v Dubaji, SAE.

2. Subjekty a metody

2.1. Prevalence cervikální infekce u žen, které se obrátily na Íránskou nemocnici v Dubaji, SAE. Studijní populace

Studie se zúčastnilo 201 pacientek ve věku 16-80 let ( let), které byly v roce 2010 odeslány na porodnicko-gynekologické oddělení Íránské nemocnice v Dubaji s příznaky jako svědění v oblasti genitálií, dyspareunie, dysurie nebo abnormální vaginální výtoky. Pacientky byly různých národností (tabulka 1) a všechny byly vdané. Pacientky byly rozděleny do tří věkových skupin: 15-30 let (skupina I), 31-40 let (skupina II) a ≥ 41 let (skupina III). Všem pacientkám byl sterilním stěrem odebrán vzorek výtěru z děložního hrdla, který byl ve virovém transportním médiu převezen k dalšímu vyšetření do Výzkumného centra klinické mikrobiologie profesora Alborziho v Nemazee Hospital, Shiraz, Írán. Studie byla schválena v Úřadu pro vzdělávání a výzkum íránské nemocnice v Dubaji.

2.2. Extrakce DNA

DNA byla extrahována ze vzorků stěrů ve 200 μl virového transportního média pomocí soupravy Invisorb spin virus DNA Mini Kit (Invitek, Berlin, Německo) podle protokolu výrobce. Pro detekci CT bylo do soupravy lyzačního pufru přidáno standardizované množství vnitřní kontrolní DNA dodávané se soupravou pro PCR v reálném čase, aby bylo možné sledovat účinnost extrakcí. Do procesu extrakce byly zahrnuty negativní a pozitivní kontroly.

2.3. V průběhu extrakce byla provedena analýza DNA. Kvantitativní PCR v reálném čase pro detekci HSV a CT

Kvantitativní PCR v reálném čase byla provedena pomocí párů oligonukleotidových primerů a sond specifických pro oblast glykoproteinu B (gB) HSV1 a HSV2, jak bylo uvedeno dříve . Byly použity primery HSVFP (5′TCC CGG TAC GAA GAC CAG3′) a HSVRP (5′AGC AGG CCG CTG TCC TTG3′) a sonda HSVTCP (5′FAMTGG TCC TCC AGC ATG GTG ATG TTG/C AGG TCGTAMRA3′). Reakce byla provedena podle následujícího protokolu: 2 minuty inkubace při 50 °C pro aktivaci AmpErase, 10 minut při 95 °C pro aktivaci polymerázy a 45 cyklů, 15 sekund při 94 °C pro denaturaci a 60 sekund při 58 °C pro žíhání, extenzi a sběr dat. Každých 50 μl směsi PCR obsahovalo 10 μl purifikované DNA, 840 nM koncentrace každého primeru a 100 nM sondy v 1x TaqMan universal PCR master mix (Applied Biosystems, Branchburg, New Jersey, USA).

Pro detekci CT byla provedena kvantitativní PCR v reálném čase s páry oligonukleotidových primerů a sond specifických pro genom CT pomocí Advanced Kit (PrimerDesign Ltd., Millbrook Technology Campus, South Hampton, UK). Amplifikace byla provedena pomocí TaqMan universal real time PCR master mix reagentů (Roche, Branchburg, New Jersey, USA). Byla provedena následujícím čtyřkrokovým protokolem: 2 minuty inkubace při 50 °C pro aktivaci AmpErase, 10 minut při 95 °C pro aktivaci polymerázy a pro 45 cyklů, 10 sekund při 95 °C pro denaturaci a 60 sekund při 60 °C pro žíhání, extenzi a sběr dat.

Všechny amplifikace byly provedeny na přístroji Applied Biosystem Sequence Detector 7500 (Applied Biosystems, USA). Do procesu extrakce byly mezi každými 20 klinickými vzorky zahrnuty negativní kontroly. Všechny negativní vzorky byly testovány dvakrát.

2.4. Detekce NG

NG byla detekována pomocí PCR detekční soupravy (CinnaGen Inc., Írán) podle protokolu výrobce. Reakční směs byla zahřívána při 94 °C po dobu 3 minut a poté inkubována 35 cyklů při 94 °C po dobu 45 sekund, 50 °C po dobu 20 sekund a 72 °C po dobu 30 sekund a 5 minut při 72 °C pro další prodloužení. Produkty PCR byly analyzovány na 1% agarózovém gelu.

2.5. Statistická analýza

Rozdíly v prevalenci HSV, CT a NG mezi věkovými skupinami byly analyzovány pomocí chí-kvadrát testu. Dále byla analyzována souvislost mezi HSV, CT a NG a výskytem plísňobakteriální infekce děložního hrdla pomocí chí-kvadrát testu. Celá data byla analyzována pomocí softwaru SPSS (SPSS for Windows, verze 16, SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Všechny hodnoty byly považovány za statisticky významné.

3. Výsledky

Kandida spp. a Coccobacilli cervikální infekce byly považovány za houbově-bakteriální infekci s prevalencí 45,3 % a nehoubově-bakteriální infekci s prevalencí 54,7 %. HSV a CT byly pozitivní u 13 (6,5 %) a 21 (10,4 %) vzorků stěrů. Počet kopií HSV DNA měřený pomocí testu PCR v reálném čase se pohyboval od 3,11 × 103 do 7,18 × 105 kopií/ml ve virovém transportním médiu (medián 4 × 104 kopií/ml) a počet kopií CT DNA se pohyboval od 3,48 × 103 do 7,11 × 106 kopií/ml ve virovém transportním médiu (medián 3,33 × 105 kopií/ml). NG byla zjištěna u 11 (5,5 %) pacientů.

Tabulka 2 uvádí prevalenci onemocnění v různých věkových skupinách. U žádného z pacientů nebyla zjištěna smíšená infekce. Mezi jednotlivými věkovými skupinami nebyly zjištěny významné rozdíly v prevalenci CT (). Prevalence NG a HSV se významně nelišila mezi skupinami I a II a II a III (); mezi skupinami I a III však byly významné rozdíly (). Navíc rozdíly v prevalenci HSV, CT a NG infekcí nebyly statisticky významné mezi skupinou s houbovou a bakteriální infekcí děložního hrdla a skupinou bez houbové a bakteriální infekce (). Tabulka 3 porovnává naše údaje v Dubaji ve Spojených arabských emirátech týkající se prevalence HSV, CT a NG s různými studiemi.

4. Diskuse

V současné studii bylo z 201 žen 6,5 %, 10,4 % a 5,5 % infikováno HSV, CT a NG. Naše současné výsledky týkající se infekce HSV, CT a NG jsou v souladu s předchozími průzkumy prevalence pohlavně přenosných chorob. V nedávné době byla v USA v rámci podobného průzkumu zjištěna DNA HSV-2 u 7 % z 509 žen . Dřívější studie v Turecku ukázala, že 12,7 % žen s nízkým rizikem bylo infikováno CT . Gaydos a kol. uvedli, že 3,8 % jejich studované ženské populace bylo infikováno NG .

Předchozí literatura naznačila, že většina infekcí HSV, CT a NG může být asymptomatická a s dlouhodobým trváním . Podobně i v této studii si žádná z žen před podstoupením screeningu nebyla vědoma své infekce, nicméně některé klinické příznaky byly patrné. Prevalence pohlavně přenosných chorob byla trvale vyšší v populaci s vysokým rizikem ve srovnání s populací považovanou za méně rizikovou. Mezi běžně uváděné rizikové faktory spojené s pohlavně přenosnými chorobami patří nesezdaný stav a více sexuálních partnerů . V nizozemském Amsterdamu byla nejvyšší prevalence HSV-1 nebo HSV-2 zaznamenána u nejmladších věkových skupin, zatímco u dospívajících a dospělých po dvacítce činila 5,26 %, resp. 4,31 % . V Peru byla prevalence infekce u žen s infekcí CT 6-5 % a s infekcí NG 0-1 % . V Jižní Koreji byla celková míra záchytu CT 2,4 % a HSV typu II 0,8 % . U tuniských sexuálních pracovnic byly CT, NG a HSV-2 PCR pozitivní u 72,9 %, 11,2 % a 1,1 % žen .

Ačkoli předchozí studie ukázaly, že mladý věk je spojen s pozitivními výsledky na CT, existují průzkumy, které nezaznamenaly žádnou souvislost mezi věkem a prevalencí onemocnění . Stejně tak naše zjištění ukázala, že mezi různými věkovými skupinami není významný rozdíl v prevalenci CT.

Různé studie ukázaly, že prevalence HSV se ve většině geografických oblastí konzistentně zvyšuje s věkem . Výsledky této studie podle očekávání ukázaly, že prevalence HSV byla významně vyšší ve skupině III ve srovnání se skupinou I. Podobná studie v Bangladéši ukázala, že prevalence protilátek proti HSV-2 byla nízká u vdaných žen mladších 20 let . Následně se tato prevalence zvyšovala s věkem, což mohlo souviset s délkou sexuálně aktivních let u žen.

Naopak naše výsledky ukázaly, že prevalence NG klesala s věkem a mezi skupinami I a III byl významný rozdíl v prevalenci infekce a infekce byla častější u mladých žen. Tento výsledek je v rozporu s jinou studií . V Nigérii byla infekce NG častější u žen ve věku 25 let .

Studie v Číně mezi sexuálními pracovnicemi prokázala, že 8 % studované populace bylo infikováno NG, což se blížilo míře infekce u mladých žen. Přestože všechny ženy v této studii byly vdané a neměly sexuální vztahy mimo rodinu, prevalence pohlavně přenosných chorob u nich byla vysoká. Je však třeba vyhodnotit sexuální vztah partnera. Dřívější průzkum ve Francii ukázal, že mezi 111 asymptomatickými mužskými partnery neplodných párů byla CT zjištěna pomocí PCR COBAS AMPLICOR u 6,3 % a sérologickým testem u 4,5 % pacientů . Zdá se tedy, že sledování sexuálních partnerů je pro prevenci pohlavně přenosných chorob nezbytné.

Houbobakteriální infekce děložního hrdla byla zjištěna u 45,3 % studované populace, ale nebyly zjištěny žádné významné rozdíly v prevalenci HSV, CT a NG infekcí mezi skupinou s houbobakteriální infekcí děložního hrdla a skupinou bez houbobakteriální infekce. Ukázalo se, že může docházet ke smíšeným infekcím s bakteriální nebo plísňovou vaginózou a STD, jako jsou HSV, CT, NG a T. vaginalis . Ke komplexnímu zhodnocení úlohy bakteriální a plísňové infekce děložního hrdla v patogenezi HSV, CT, NG a dalších pohlavně přenosných chorob je zapotřebí dalších šetření. Sledování prevalence a incidence pohlavně přenosných chorob v populaci a zejména mezi mládeží by pomohlo státním orgánům provádět a vyhodnocovat preventivní strategie a úsilí. Vzhledem ke značnému a dlouhodobému dopadu pohlavně přenosných chorob na kvalitu života a ekonomickým ztrátám způsobeným pohlavně přenosnými chorobami v důsledku vysokých nákladů na léčbu je potřeba přesného hodnocení pohlavně přenosných chorob na celém světě. Jerman a kol. uvádějí, že v roce 2005 se v Kalifornii vyskytlo 1,1 milionu nových případů pohlavně přenosných chorob u mladých pacientů, přičemž přímé náklady na léčbu činily 1,1 miliardy USD . Symptomatické pohlavně přenosné nemoci jsou navíc pouhou špičkou ledovce a většina těchto onemocnění je asymptomatická. Programy screeningu pohlavně přenosných chorob jsou tedy důležité ve všech zemích, aby se zabránilo přenosu onemocnění a pomohlo to vědcům při plánování nových léčebných protokolů. Because of public health importance of STDs, preventing measures and education of women seem necessary.

Conflict of Interests

The authors declare that there is no conflict of interests regarding the publication of this paper.

Acknowledgment

The authors appreciate the Iranian Hospital cooperation especially the Departments of Pathology and Obstetrics and Gynecology.